服務(wù)簡介   

多重?zé)晒舛?/span>PCR(Multiple fluorescencequantitative PCR)技術(shù)是在熒光定量PCR技術(shù)的基礎(chǔ)上，利用幾種不同熒光基團(tuán)的組合，結(jié)合儀器對不同通道熒光的檢測能力實(shí)現(xiàn)對多個(gè)靶標(biāo)的實(shí)時(shí)定量檢測。引物和探針的特異性是多重qPCR實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。

微基生物為客戶提供高質(zhì)量的多重qPCR引物、探針對設(shè)計(jì)服務(wù)。針對多個(gè)目標(biāo)菌株或微生物種類，設(shè)計(jì)多重qPCR引物和探針組合，實(shí)現(xiàn)同時(shí)檢測多個(gè)目標(biāo)微生物，提高檢測效率和準(zhǔn)確性。

服務(wù)亮點(diǎn)

高效檢測：能夠同時(shí)檢測多個(gè)靶標(biāo)，有效節(jié)省時(shí)間和成本。

準(zhǔn)確定量：高特異性和靈敏度，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

定制化服務(wù)：根據(jù)客戶需求設(shè)計(jì)個(gè)性化的引物/探針對組合。

全流程服務(wù)：從設(shè)計(jì)到驗(yàn)證的全流程服務(wù)，助力實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。

服務(wù)流程 

1.目標(biāo)基因序列分析

收集并分析目標(biāo)微生物或基因的序列信息，確定保守區(qū)域。

2.引物和探針設(shè)計(jì)

根據(jù)保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和探針，確保相同反應(yīng)條件下具有良好的擴(kuò)增效率和特異性。

3.實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證引物和探針的擴(kuò)增效率和特異性，優(yōu)化反應(yīng)條件，確保檢測結(jié)果的可靠性。

4.結(jié)果分析與報(bào)告

對檢測結(jié)果進(jìn)行分析，提供詳細(xì)分析報(bào)告。

客戶提供信息 

提供多個(gè)目標(biāo)微生物或基因的相關(guān)信息，包括物種名稱、基因名稱等。

案例分享 

Multiplex TaqMan qPCR Assay for Detection, Identification, and Quantification of Three Sclerotinia Species.2022

開發(fā)一種能夠同時(shí)檢測、鑒定和定量三種核盤菌的多重TaqMan qPCR檢測方法。該方法通過設(shè)計(jì)針對每種核盤菌的特異性TaqMan引物/探針組合，實(shí)現(xiàn)了這三種真菌的高效檢測。

樣本類型：菌核樣本、土壤樣本以及純培養(yǎng)物。

研究結(jié)果

1. 該方法實(shí)現(xiàn)了三種核盤菌的高效檢測，具有高特異性和靈敏度。

2. 適用于不同類型的樣本檢測，為核盤菌病害的早期診斷和防控提供了有力工具。

用于檢測核盤菌屬物種的 TaqMan 檢測引物和探針的設(shè)計(jì)

單重和多重TaqMan qPCR檢測核盤菌的特異性

多重qPCR檢測的標(biāo)準(zhǔn)曲線

微基生物團(tuán)隊(duì)擁有豐富的多重qPCR設(shè)計(jì)和優(yōu)化經(jīng)驗(yàn)，提供多重qPCR引物/探針對設(shè)計(jì)的全流程服務(wù)，全方位的技術(shù)支持，確保您實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。

多重qPCR引物/探針對設(shè)計(jì)，首發(fā)于微基生物。

服務(wù)亮點(diǎn)

精準(zhǔn)富集與檢測：結(jié)合超多重 PCR 擴(kuò)增或靶向捕獲技術(shù)與高通量測序，精準(zhǔn)富集目標(biāo)微生物基因序列，實(shí)現(xiàn)高效精準(zhǔn)檢測。

高靈敏度與特異性：靶向檢測特定微生物特定基因，通過多重PCR擴(kuò)增富集核酸序列提高檢測靈敏度，特異性探針/引物設(shè)計(jì)減少非目標(biāo)序列干擾，保證準(zhǔn)確性。

全面覆蓋與多重檢測：能同時(shí)檢測多種微生物，涵蓋細(xì)菌、病毒、真菌、寄生蟲等類型，全面分析復(fù)雜微生物群落。

廣泛適用與定制：適用于多種微生物檢測需求，包括環(huán)境微生物監(jiān)測、臨床樣本病原微生物檢測等，可根據(jù)需求定制探針/引物和檢測方案。

檢測原理

tNGS（靶向測序）結(jié)合超多重PCR擴(kuò)增或靶向捕獲技術(shù)與高通量測序。

引物設(shè)計(jì)與多重PCR擴(kuò)增：根據(jù)特定微生物菌群的基因組信息，利用生物信息學(xué)工具設(shè)計(jì)特異性探針/引物。通過多重PCR技術(shù)同時(shí)擴(kuò)增多個(gè)目標(biāo)基因片段，富集微生物核酸序列。

高通量測序與生物信息學(xué)分析：對擴(kuò)增得到的DNA片段進(jìn)行高通量測序，結(jié)合生物信息學(xué)分析比對數(shù)據(jù)庫，鑒定微生物種類及其基因特征，實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)檢測與分析。

樣本類型

臨床樣本：血液、鼻/咽拭子、痰液、尿液、糞便、腦脊液、穿刺液等。

環(huán)境樣本：土壤、水體、空氣、食品等。

其他生物樣本：動(dòng)植物組織

微基生物深耕微生物檢測領(lǐng)域多年，在目標(biāo)微生物的探針/引物設(shè)計(jì)方面積累了深厚的經(jīng)驗(yàn)。公司擁有成熟完善的服務(wù)流程及先進(jìn)的設(shè)計(jì)平臺(tái)，能夠依據(jù)項(xiàng)目的獨(dú)特需求，設(shè)計(jì)出與目標(biāo)微生物高度匹配的探針/引物。

特定微生物菌群超多重tNGS設(shè)計(jì)檢測，首發(fā)于微基生物。

服務(wù)簡介 

針對特定微生物菌株定量檢測，微基生物提供基于全基因組序列的菌株特異性TaqMan探針/引物設(shè)計(jì)、合成及驗(yàn)證服務(wù)，確保探針/引物的高特異性和擴(kuò)增效率，滿足復(fù)雜微生物群落背景下的單菌株檢測需求。

服務(wù)亮點(diǎn) 

1.高特異性與靈敏度

全基因組比對和優(yōu)化設(shè)計(jì)，確保引物/探針僅與目標(biāo)序列高度匹配，避免非特異性擴(kuò)增。

2.靈活的檢測方法

提供qPCR探針法和液滴數(shù)字PCR（ddPCR）技術(shù)方案，滿足不同樣本類型和研究需求。

3.全流程服務(wù)

數(shù)據(jù)庫構(gòu)建到引物/探針設(shè)計(jì)、驗(yàn)證與優(yōu)化，再到大規(guī)模檢測，一站式解決實(shí)驗(yàn)需求。

4.可靠的數(shù)據(jù)支持

嚴(yán)格的質(zhì)量控制和優(yōu)化流程，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。

服務(wù)流程 

1.數(shù)據(jù)庫構(gòu)建

通過查詢菌株的序列信息，構(gòu)建該菌株的全基因組數(shù)據(jù)庫。

2.特異性引物/探針設(shè)計(jì)

利用生物信息學(xué)工具，設(shè)計(jì)針對目標(biāo)菌株的特異性引物或探針。

3.驗(yàn)證及優(yōu)化

合成設(shè)計(jì)好的引物，并進(jìn)行特異性、擴(kuò)增效率等驗(yàn)證和優(yōu)化。

4.大規(guī)模檢測

使用驗(yàn)證通過的引物進(jìn)行菌株特異性進(jìn)行大規(guī)模檢測。

檢測方法 

1.TaqMan qPCR探針法

利用與目標(biāo)菌株核酸序列特異性結(jié)合的探針，提高檢測靈敏度和特異性。

驗(yàn)證方法：通過分析特異性、靈敏度和重復(fù)性來驗(yàn)證引物和探針。使用已知含目標(biāo)菌株DNA的樣本檢測特異性；稀釋目標(biāo)DNA模板測靈敏度；重復(fù)實(shí)驗(yàn)計(jì)算Ct值和標(biāo)準(zhǔn)差評估重復(fù)性。

3.ddPCR定量檢測

將反應(yīng)體系分割成大量納升液滴，每個(gè)液滴獨(dú)立進(jìn)行PCR反應(yīng)，通過陽性和陰性液滴數(shù)量比計(jì)算目標(biāo)核酸絕對拷貝數(shù)。

驗(yàn)證方法：通過與傳統(tǒng)培養(yǎng)法或qPCR法比較驗(yàn)證ddPCR引物和探針。將ddPCR結(jié)果與培養(yǎng)法計(jì)數(shù)結(jié)果比較，評估準(zhǔn)確性；與qPCR法比較，分析相關(guān)性和一致性，同時(shí)分析重復(fù)實(shí)驗(yàn)液滴數(shù)量分布和標(biāo)準(zhǔn)差評估重復(fù)性。

客戶提供信息 

提供該菌株的拉丁文全名。提供菌株的測序結(jié)果（建議提供全序列而非16S全長序列）。

案例分享 

案例1：艱難梭菌毒素基因的絕對定量檢測（Establishment and application of absolute quantitative PCR method for tedA and tcdB genes of Clostridioides difficile.2025）

通過對產(chǎn)毒性艱難梭菌的tedA和tcdB基因進(jìn)行特異性引物和探針設(shè)計(jì)，結(jié)合qPCR技術(shù)，實(shí)現(xiàn)對產(chǎn)毒性艱難梭菌的高靈敏度和特異性的定量檢測。該方法具有線性范圍廣、靈敏性高、特異性和可重復(fù)性良好等特點(diǎn)。

案例2：ddPCR系統(tǒng)在病原微生物檢測中的應(yīng)用（Qualitative and quantitative detection of surgical pathogenic microorganisms Escherichia coli and Staphylococcus aureus based on ddPCR system.2021）

利用微滴數(shù)字PCR（ddPCR）系統(tǒng)對外科病原微生物大腸桿菌和金黃色葡萄球菌進(jìn)行定性和定量檢測。通過設(shè)計(jì)針對特定基因的引物和探針，結(jié)合ddPCR技術(shù)實(shí)現(xiàn)高精度定量檢測。研究證明ddPCR系統(tǒng)在血液樣本中具有極高的檢測準(zhǔn)確性。

ddPCR系統(tǒng)同時(shí)檢測模擬細(xì)菌血樣(大腸桿菌ATCC25922和金黃色葡萄球菌ATCC25923)的定量結(jié)果。

菌株特異性TaqMan探針/引物設(shè)計(jì)及驗(yàn)證是微生物檢測與定量研究的關(guān)鍵，qPCR探針法、ddPCR技術(shù)各有特點(diǎn)，適用于不同場景下的菌株檢測與定量分析。

菌株特異性TaqMan探針/引物設(shè)計(jì)，首發(fā)于微基生物。

在微生物組學(xué)研究中，準(zhǔn)確檢測和定量分析目標(biāo)菌屬或菌種是揭示微生物群落功能機(jī)制的關(guān)鍵。微基生物依托先進(jìn)的生物信息學(xué)技術(shù)和豐富的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，提供基于全基因組序列的菌種/屬特異性TaqMan探針/引物設(shè)計(jì)、合成及驗(yàn)證服務(wù)。從而實(shí)現(xiàn)在復(fù)雜的微生物群落背景下實(shí)現(xiàn)單菌種級別的絕對定量。

服務(wù)亮點(diǎn) 

1.高特異性與靈敏度

全基因組比對和優(yōu)化設(shè)計(jì)，確保探針/引物僅與目標(biāo)序列高度匹配，避免非特異性擴(kuò)增。

2.靈活的檢測方法

提供qPCR探針法和液滴數(shù)字PCR（ddPCR）等檢測方法，滿足不同樣本類型和研究需求。

3.全流程服務(wù)

數(shù)據(jù)庫構(gòu)建到探針/引物設(shè)計(jì)、驗(yàn)證與優(yōu)化，再到大規(guī)模檢測，一站式解決實(shí)驗(yàn)需求。

4.可靠的數(shù)據(jù)支持

嚴(yán)格的質(zhì)量控制和優(yōu)化流程，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。

服務(wù)流程 

1.數(shù)據(jù)庫構(gòu)建

查詢菌種/屬的序列信息，構(gòu)建全基因組數(shù)據(jù)庫。

2.引物/探針設(shè)計(jì)

利用生物信息學(xué)工具，設(shè)計(jì)特異性引物或探針。

3.驗(yàn)證與優(yōu)化

合成設(shè)計(jì)好的引物或探針，并進(jìn)行特異性、擴(kuò)增效率等驗(yàn)證和優(yōu)化。

4.大規(guī)模檢測

使用驗(yàn)證通過的引物或探針對目標(biāo)菌種/屬進(jìn)行大規(guī)模檢測。

qPCR TaqMan探針檢測方法 

微基生物提供基于TaqMan探針的qPCR探針/引物設(shè)計(jì)服務(wù)。確保探針與目標(biāo)序列特異性結(jié)合，通過Taq酶水解探針產(chǎn)生可檢測的熒光信號。優(yōu)化Tm值和長度，提高擴(kuò)增效率和特異性。                           

qPCR TaqMan探針法

液滴數(shù)字PCR（ddPCR）法

微基生物提供基于液滴數(shù)字PCR（ddPCR）的探針/引物設(shè)計(jì)服務(wù)。無需標(biāo)準(zhǔn)曲線，直接對目標(biāo)菌種進(jìn)行絕對定量分析。特別適用于臨床樣本、環(huán)境樣本及低豐度菌種的檢測。

客戶提供信息 

目標(biāo)菌種/屬的拉丁文全名。

目標(biāo)菌種的全基因組序列或靶標(biāo)基因序列。

案例分享 

Detecting and quantifying Veillonella by real-time quantitative PCR and droplet digital PCR.（2024年）

針對維洛內(nèi)拉菌（Veillonella）低豐度樣本的檢測需求，設(shè)計(jì)特異性引物和探針，評估qPCR和ddPCR方法的特異性和敏感性。

研究方法

1.基于16S rRNA基因序列設(shè)計(jì)引物和探針，進(jìn)行qPCR和ddPCR檢測。

2.使用模擬臨床樣本測試兩種方法的特異性和靈敏度。

3.收集炎癥性腸病（IBD）患者的臨床樣本，驗(yàn)證檢測系統(tǒng)的有效性。

研究結(jié)果

1.qPCR的檢測靈敏度100拷貝/μL，能夠準(zhǔn)確檢測10³到10⁸CFU/mL的Veillonella濃度。

2.ddPCR的檢測靈敏度為11.3拷貝/μL，適合檢測10¹到10⁴CFU/mL的低豐度樣本。

3.臨床樣本中，qPCR和ddPCR的檢測結(jié)果與平板計(jì)數(shù)法一致，驗(yàn)證了檢測系統(tǒng)的準(zhǔn)確性。

4.通過ddPCR檢測到的Veillonella種類包括V.dispar、V.nakazawae和V.rodentium。      

qPCR檢測的靈敏度和特異性結(jié)果 

 ddPCR檢測的靈敏度和特異性結(jié)果

qPCR和ddPCR均適用于檢測和定量維洛內(nèi)拉菌，其中qPCR更適合檢測較高豐度的樣本，而ddPCR更適合檢測低豐度的樣本。

微基生物致力于為微生物研究提供全面、高效的解決方案。選擇菌種/屬特異性TaqMan探針/引物設(shè)計(jì)與檢測服務(wù)，讓您的實(shí)驗(yàn)更高效、更可靠！

菌種/屬特異性TaqMan探針/引物設(shè)計(jì)，首發(fā)于微基生物。

微基生物目前已完成兩百余種特定菌種qPCR/dPCR探針法檢測試劑盒開發(fā)。涵蓋了眾多在醫(yī)學(xué)、食品、環(huán)境、工業(yè)等領(lǐng)域具有重要研究價(jià)值和應(yīng)用意義的微生物菌種。

快速響應(yīng)客戶需求，定制專屬qPCR檢測試劑盒

l需求提交：客戶只需提供特定菌種拉丁名，格微®的專業(yè)團(tuán)隊(duì)將迅速啟動(dòng)定制流程。

l5個(gè)工作日內(nèi)：完成對新檢測菌種的系統(tǒng)評估。

l急速定制：評估通過后，即可下單定制，起訂量僅為2份（共200次）試劑盒。

l20個(gè)工作日內(nèi)：確保交付高質(zhì)量的試劑盒產(chǎn)品。

部分菌種特異性qPCR探針引物評估列表

*上述覆蓋率涉及的靶基因，已排除過非目標(biāo)菌的非特異性擴(kuò)增。

高效交付與質(zhì)量保障體系

1 全面詳實(shí)的評估報(bào)告

菌種內(nèi)全部已知菌株的覆蓋率百分比：全面分析特定菌種下GeneBank中已知菌株全基因組序列，鎖定高覆蓋率基因，確保對目標(biāo)菌種內(nèi)全部菌株的高覆蓋率。

對所有非目標(biāo)微生物的非特異性檢出評估結(jié)果：調(diào)取GeneBank中全部已知非目標(biāo)微生物序列，評估候選探針、引物的非特異性反應(yīng)，篩選出具有高特異性的探針和引物。

2 卓越檢測性能與便捷操作

高靈敏度：檢測限低至20拷貝/反應(yīng)（qPCR）或單拷貝（dPCR），檢測低含量目標(biāo)微生物。

多重檢測：探針法qPCR支持多重qPCR/dPCR檢測，支持同一反應(yīng)體系內(nèi)同時(shí)檢測2-4種菌種，大大提高實(shí)驗(yàn)效率，節(jié)省時(shí)間與成本。

即用型預(yù)混配方：含DNA聚合酶、dNTP、UNG酶等成分，簡化實(shí)驗(yàn)流程，減少誤差。

dUTP/UNG防污染系統(tǒng)：降低PCR產(chǎn)物氣溶膠污染，極大程度上防止假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。

提供陽性/陰性對照（1×10⁷拷貝/μL）：有效區(qū)分假陰性與假陽性，保障結(jié)果可信度。

3 全流程方法學(xué)驗(yàn)證

通過qPCR條件優(yōu)化、線性范圍、靈敏度、抗干擾性等全流程驗(yàn)證，qPCR定量線性范圍達(dá)5個(gè)數(shù)量級，確保試劑盒性能卓越可靠。

真實(shí)科研案例，見證卓越效果

使用格微@菌種特異性qPCR探針試劑盒對樣本進(jìn)行檢測，以2*10⁶copies-2*10¹copies/反應(yīng)的質(zhì)粒為模板展示了不同熒光信號（FAM、HEX、ROX、CY5）在TE背景和人基因組DNA背景下的檢測結(jié)果，具體如下：

總體擴(kuò)增情況：從總體擴(kuò)增圖來看，各熒光信號對應(yīng)的曲線呈現(xiàn)明顯的S型擴(kuò)增曲線，表明在反應(yīng)體系中模板DNA得到了有效的擴(kuò)增。試劑盒具有較好的穩(wěn)定性和可靠性。

不同背景下CT值：在TE背景和人的基因組DNA背景下，針對A、B、C、D菌，四種熒光信號的標(biāo)準(zhǔn)曲線均呈現(xiàn)良好線性，擴(kuò)增效率在90%-110%之間，線性關(guān)系在0.999。試劑盒在復(fù)雜背景中可特異性檢測目標(biāo)微生物DNA，具有高準(zhǔn)確性、特異性和抗干擾能力。

定制格微®菌種特異性TaqMan檢測試劑盒，就是選擇精準(zhǔn)、高效與專業(yè)。讓我們攜手共進(jìn)，在科研的道路上不斷探索，為微生物研究領(lǐng)域貢獻(xiàn)更多的力量。

急速定制：格微?菌種特異性qPCR探針檢測試劑盒，首發(fā)于微基生物。