免費(fèi)設(shè)計(jì)：提供方案提綱

整體定制：提供方案提綱、文獻(xiàn)查詢解析、詳細(xì)項(xiàng)目計(jì)劃書、結(jié)果解讀及方案修改等。

定制化微生物研究整體方案設(shè)計(jì)服務(wù)，通過(guò)整合16S擴(kuò)增子測(cè)序、宏基因組、絕對(duì)定量微生物組學(xué)、代謝組、培養(yǎng)組學(xué)、微生物FISH、qPCR/ddPCR及動(dòng)物模型等技術(shù)，為客戶提供從樣本采集、保存到實(shí)驗(yàn)方法優(yōu)化的全流程定制化方案。

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微生物整體研究方案 免費(fèi)設(shè)計(jì)，首發(fā)于微基生物。

2  血液微生物組樣本采集方法與注意事項(xiàng)

2.1全血取樣：研究血液微生物多樣性的首選

全血樣本可完整保留血漿、紅細(xì)胞、白細(xì)胞等各組分中的微生物及其遺傳物質(zhì)，是全面分析血液微生物群落的核心選擇。經(jīng)優(yōu)化檢測(cè)流程處理后，微生物檢出效率與紅細(xì)胞層/血細(xì)胞層樣本一致性達(dá)98%以上，且無(wú)需額外離心分層，操作簡(jiǎn)單，污染風(fēng)險(xiǎn)低。

2.1.1全血樣本采樣步驟

采樣前準(zhǔn)備：選擇符合實(shí)驗(yàn)條件的受試者，告知實(shí)驗(yàn)相關(guān)信息并簽署知情同意書；準(zhǔn)備EDTA或肝素抗凝采血管、一次性采血針、無(wú)菌注射器、冰浴設(shè)備等，確保所有耗材無(wú)菌。

采集操作：采集2-5mL外周血于抗凝采血管中或進(jìn)口離心管中（提前添加抗凝劑）。輕輕顛倒搖晃混勻（不可劇烈搖晃，以防溶血）。

2.2血液中不同組分的取樣：針對(duì)性研究特定微生物群落

若需聚焦特定血液組分中的微生物，可采集全血后在實(shí)驗(yàn)室規(guī)范離心分層，再選取目標(biāo)組分檢測(cè)。建議先采集全血，再進(jìn)行離心處理，既滿足分層樣本需求，又可保留全血樣本以備復(fù)檢或其他檢測(cè)。

血漿：微生物含量極低（僅占0.03%），聚焦細(xì)胞游離微生物DNA（cfmDNA），適用于感染早期診斷、疾病相關(guān)微生物標(biāo)志物篩選等研究。

Buffy 層（白細(xì)胞層）：微生物DNA含量最豐富，適用于高靈敏度微生物DNA檢測(cè)，尤其適合研究胞內(nèi)寄生微生物及極低豐度的微生物。

紅細(xì)胞層：含少量微生物DNA，適合分析紅細(xì)胞內(nèi)寄生微生物，避免溶血影響核酸提取效率。

2.2.1分層樣本采樣步驟

采樣前準(zhǔn)備：與全血采樣一致，需額外準(zhǔn)備低溫離心機(jī)、無(wú)菌離心管等設(shè)備。

全血采集：采集2-5mL外周血于抗凝采血管中或進(jìn)口離心管中（提前添加抗凝劑），輕輕顛倒搖晃混勻（不可劇烈搖晃，以防溶血），4℃或冰浴靜置約10min，先低溫低速離心（3000rpm，10min，4℃），使血液分為血漿層（上層）、白細(xì)胞和血小板層（中層）、紅細(xì)胞層（下層）。用無(wú)菌移液器或吸管分別吸取目標(biāo)組分。

2.3注意事項(xiàng)

a）不要使用無(wú)抗凝劑的采血管（凝血后，微生物基因組提取變得非常困難）。

b）采血過(guò)程需等消毒劑（乙醇、異丙醇等）完全揮發(fā)后采樣。

c）采集過(guò)程中，樣品放置時(shí)間，離心時(shí)間、等保持一致。

d）紅細(xì)胞/血細(xì)胞層得率約50%，1mL外周血可得約0.5mL血細(xì)胞層。

e) 樣本按500μL/支分裝，方便后繼需要多次檢測(cè)，盡量避免樣本多次凍融。

f）血細(xì)胞層如發(fā)生溶血（凍存前或凍存后），只要不凝塊，不影響微生物基因組DNA提取。

3  血液代謝組樣本采集方法與注意事項(xiàng)

3.1 血漿樣本代謝組檢測(cè) 

3.1.1 采集步驟

采集2-5mL外周血于抗凝采血管中或進(jìn)口離心管中（需提前添抗凝劑），輕輕顛倒搖晃混勻（不可劇烈搖晃，以防溶血），4℃或冰浴靜置約10min，先低溫低速離心（3000rpm， 10min，4℃），取大部分上層血漿，200μL分裝到潔凈螺口管中，液氮速凍15min（可省略）。

3.1.2注意事項(xiàng)

a) LC-MS平臺(tái)推薦使用肝素鈉/EDTA 抗凝，NMR平臺(tái)推薦使用肝素鈉抗凝；血漿樣品不推薦使用檸檬酸做抗凝劑，因?yàn)闄幟仕崾?/span>TCA循環(huán)中的重要物質(zhì)，使用檸檬酸鈉抗凝劑會(huì)引入外源污染。而EDTA會(huì)影響NMR采譜。需注意肝素鈉會(huì)對(duì)RNA相關(guān)的實(shí)驗(yàn)有負(fù)面作用，主要是因?yàn)闀?huì)抑制反轉(zhuǎn)錄酶活性。請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適抗凝管。

b）采血過(guò)程需等消毒劑（乙醇、異丙醇等）完全揮發(fā)后采樣。

c）采集過(guò)程中，樣品放置時(shí)間，離心時(shí)間等保持一致。

d）分裝使用的離心管盡可能使用低吸附離心管。

e）血漿得率約50%，1mL外周血可得約0.5mL血漿。

f) 樣本按200μL/支分裝，是方便后繼需要多次檢測(cè)，應(yīng)盡量避免樣本多次凍融情況。

3.2血清樣本代謝組檢測(cè)

3.2.1 采集步驟

采集2-5mL外周血于無(wú)任何添加劑的采血管或進(jìn)口離心管中，輕輕顛倒搖晃混勻（不可劇烈搖晃，以防溶血），4℃或冰浴靜置約1h（確認(rèn)凝集出血塊），先低溫低速離心（3000rpm，10min，4℃）；取大部分上層血清，將上述血清按200μL/支，分裝至螺口管中，液氮速凍15min（可省略）。如血清量不夠，可再次高速離心（12000rpm，10min，4℃），取剩余少量上層血清，如發(fā)生溶血，則不可再取/用。

3.2.2 注意事項(xiàng)

a）血清樣品推薦使用無(wú)采任何添加劑的采血管（不用有促凝劑的采血管）。

b）采血過(guò)程需等消毒劑（乙醇、異丙醇等）完全揮發(fā)后采樣。

c）采集過(guò)程中，樣品放置時(shí)間，離心時(shí)間等保持一致。

d）血清得率約30-50%，1mL外周血可得約0.3-0.5mL血清。

e) 樣本按200μL/支分裝，是方便后繼需要多次檢測(cè)，應(yīng)盡量避免樣本多次凍融情況。

4 推薦采樣量

5  樣本的保存和寄送

短期保存（≤24小時(shí)）：采集后立即置于4℃冷藏保存，避免室溫放置超過(guò)4小時(shí)。分層樣本需單獨(dú)密封保存，防止交叉污染，尤其血漿樣本需避免與細(xì)胞組分接觸導(dǎo)致游離DNA降解。

長(zhǎng)期保存（>24 小時(shí)）：樣本按對(duì)應(yīng)分裝標(biāo)準(zhǔn)分裝入潔凈螺口管，避免反復(fù)凍融。-80℃冰箱可保存6-12個(gè)月，-20℃冰箱可短期保存1-3個(gè)月。

特殊注意事項(xiàng)：

需保留微生物活性或進(jìn)行微生物培養(yǎng)的樣本，必須使用抗凝劑防止凝固，存放于室溫或4℃冰箱，且需盡快開(kāi)展后續(xù)實(shí)驗(yàn)，不宜長(zhǎng)期存放。

冷凍后的全血樣本解凍后，輕微溶血可正常檢測(cè)；嚴(yán)重溶血（血液呈醬油色）需重新采集，避免血紅蛋白干擾核酸提取。

若無(wú)法實(shí)現(xiàn)低溫保存，可使用微基生物研發(fā)的微生物DNA常溫采集保存套裝，樣本可在常溫下穩(wěn)定保存14天。 

6  附（抗凝管的種類和顏色）

提示：血液樣本的代謝組學(xué)檢測(cè)，采血管只接收紅蓋（無(wú)添加），綠蓋（添加肝素鈉），紫蓋（添加EDTA）。禁用PAXgene管，添加促凝劑的紅蓋管等。

7 常見(jiàn)問(wèn)題解答

1）全血樣本與分層樣本的檢測(cè)結(jié)果有差異嗎？

無(wú)顯著差異，全血樣本經(jīng)優(yōu)化檢測(cè)流程后，微生物檢出效率與紅細(xì)胞層/血細(xì)胞層樣本一致性達(dá)98%以上，不影響檢測(cè)準(zhǔn)確性。

2）忘記加抗凝劑的全血樣本還能檢測(cè)嗎？

不可檢測(cè)。未抗凝的血液會(huì)發(fā)生凝固，導(dǎo)致細(xì)胞裂解和微生物失活，嚴(yán)重影響檢測(cè)結(jié)果。

3）全血樣本可以檢測(cè)哪些微生物？

適用于檢測(cè)細(xì)菌、真菌、病毒、非典型病原體等多種微生物。全血mNGS技術(shù)可以同時(shí)檢測(cè)數(shù)千種微生物，提高了檢測(cè)的全面性。

4）采血量對(duì)檢測(cè)結(jié)果有影響嗎？

有影響，采血量直接影響檢測(cè)的靈敏度。推薦按標(biāo)準(zhǔn)采血量采集，采血量不足會(huì)降低微生物檢出率。

5）可以使用不同類型的抗凝劑嗎？

推薦使用EDTA抗凝劑；肝素抗凝劑也可使用，但需注意其可能抑制某些PCR反應(yīng)；不推薦使用枸櫞酸鈉抗凝劑。

6）可以檢測(cè)到所有病原體嗎？

目前沒(méi)有任何一種方法可以檢測(cè)到所有病原體。不同檢測(cè)方法各有優(yōu)劣，微基生物可根據(jù)您的臨床需求選擇合適方法，必要時(shí)聯(lián)合多種方法提高檢出率。

血液微生物組、代謝組檢測(cè)樣本采集說(shuō)明，首發(fā)于微基生物。

目前微基生物已與中科院、北京大學(xué)、清華大學(xué)、長(zhǎng)征醫(yī)院、紅房子醫(yī)院等多所高?？蒲性核腿揍t(yī)院合作，已檢測(cè)過(guò)人、小鼠、大鼠、猴子等多種動(dòng)物的糞便及腸道內(nèi)容物。微基生物可采用二代高通量測(cè)序、三代高通量測(cè)序、PCR-DGGE等方法，對(duì)樣本中微生物的DNA進(jìn)行測(cè)定，并通過(guò)生信統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)大量數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，揭示腸道中微生物的種類以及它們之間的相對(duì)豐度和進(jìn)化關(guān)系；還可以通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法，定量的研究腸道菌群，探討微生物多樣性，研究腸道微生物與環(huán)境間的相關(guān)關(guān)系；還可以通過(guò)厭氧培養(yǎng)，獲得腸道微生物中的菌種，從菌株水平上研究腸道微生物的功能和作用。

目前腸道微生物的主要研究方向：
（1）尋找疾病組和健康組間腸道菌群的差異：
分別采集健康人群和疾病人群的糞便樣本，比較健康組和疾病組之間腸道菌群的差異，尋找與疾病相關(guān)的marker，這是目前最典型的研究方法；
（2）研究藥物或飲食干預(yù)群體的腸道菌群：
分別采集藥物或飲食干預(yù)前、后的群體的糞便樣本，比較個(gè)體在不同干預(yù)階段的腸道菌群的差異；
（3）同一群體、不同生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)期的腸道菌群：
如分別采集嬰兒出生后0個(gè)月、4個(gè)月、12個(gè)月等時(shí)間的糞便樣本，對(duì)嬰幼兒的腸道菌群進(jìn)行研究；
（4）研究某一疾病發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中的群體的腸道菌群：
如分別選擇健康人、結(jié)直腸腺瘤患者（大部分的結(jié)直腸癌由腺瘤演變而來(lái)）、結(jié)直腸癌患者群體，研究與結(jié)直腸癌疾病進(jìn)程相關(guān)的marker；
（5）研究同一群體多個(gè)身體部位的微生物：
如分別選取同一人群的糞便、唾液、牙菌斑等樣本進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。

微基生物可以做什么：
（1）研究樣本中微生物的種類及其對(duì)應(yīng)的豐度；
（2）對(duì)樣本中某一種微生物進(jìn)行定量；
（3）通過(guò)厭氧培養(yǎng)獲得樣本中微生物的菌株。

微基生物提供腸道微生物多樣性分析的整體科研服務(wù)：實(shí)驗(yàn)規(guī)劃->樣本采集保存->分子實(shí)驗(yàn)->生信統(tǒng)計(jì)分析->論文協(xié)助

已檢測(cè)對(duì)象：
人、小鼠、大鼠、猴子、雞、羊、魚、馬、驢、熊貓、穿山甲等動(dòng)物的糞便或腸道內(nèi)容物；

檢測(cè)類型：
細(xì)菌、真菌、放線菌等；

檢測(cè)方法：
二代高通量測(cè)序、三代高通量測(cè)序、PCR-DGGE、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、厭氧培養(yǎng)；

檢測(cè)平臺(tái)：
（1）微基生物擁有Illumina MiSeq、Ion PGM高通量測(cè)序分析，PacBio第三代高通量測(cè)序分析，PCR-DGGE變性梯度凝膠分析，實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time qPCR），克隆文庫(kù)等檢測(cè)平臺(tái)。
（2）具有厭氧培養(yǎng)系統(tǒng)，可以分離糞便樣本中的微生物。

樣本采集耗材：
為客戶提供樣本采集保存耗材，包括糞便采集盒、常溫保存液、取樣勺和保存管等。

樣本采集方法：
（1）人糞便：采集新鮮的、中后段、內(nèi)部的糞便樣本，每個(gè)樣本需1g，采好后立刻凍存于-80℃冰箱，保存期間切記反復(fù)凍融。
（2）小鼠糞便：建議采用拎尾法或者代謝籠采集新鮮糞便，每個(gè)樣本需1g，采好后立刻凍存于-80℃冰箱，切記反復(fù)凍融。
（3）大鼠糞便：可采用代謝籠采集新鮮糞便樣本，每個(gè)樣本需1g，采好后立刻凍存于-80℃冰箱，切記反復(fù)凍融。
對(duì)于其他樣本的采集，可咨詢微基生物技術(shù)支持，400-660-9270.
若無(wú)法實(shí)現(xiàn)低溫保存，可采用微基生物研發(fā)的常溫采集保存套裝，可在常溫下保存14天。

送樣要求：
（1）糞便樣本或腸道內(nèi)容物樣本：每樣本需1g，新鮮取樣，凍存于-80℃，保存期間切忌反復(fù)凍融，送樣時(shí)請(qǐng)使用冰袋或干冰運(yùn)輸；
（2）DNA樣本：DNA總量≥300ng，濃度≥10ng/μL，OD260/280=1.8-2.0，并確保DNA無(wú)降解，樣本保存期間切忌反復(fù)凍融，送樣時(shí)請(qǐng)使用冰袋或干冰運(yùn)輸。

技術(shù)路線：

高通量分析流程

PCR-DGGE分析流程

生物信息與統(tǒng)計(jì)學(xué)服務(wù)：

案例分析：

標(biāo)題：巴布亞新幾內(nèi)亞人腸道微生物：組成，多樣性及生態(tài)形成過(guò)程 （Cell Reports, IF: 8.358）

研究領(lǐng)域：腸道微生物

分析物種：細(xì)菌

高通量測(cè)序平臺(tái)：Illumina MiSeq

測(cè)序區(qū)域：16S rRNA gene V5-V6 region

主要結(jié)果：

(1）PNG和US人群腸道微生物多樣性分析

（2）細(xì)菌多樣性圖譜

　?。?）

（4）

原文鏈接：http://www.cell.com/cell-reports/abstract/S2211-1247(15)00340-Xv

參考文獻(xiàn)：

Martinez, I., J. C. Stegen, M. X. Maldonado-Gomez, A. M. Eren, P. M. Siba, A. R. Greenhill and J. Walter (2015). “The gut microbiota of rural papua new guineans: composition, diversity patterns, and ecological processes.” Cell Rep 11(4): 527-538.

微基生物進(jìn)行人體健康相關(guān)的研究與應(yīng)用：

腸道微生態(tài)，首發(fā)于微基生物。

　　口腔是人體微生物定植生存的重要生態(tài)區(qū)，口腔微生物不僅有細(xì)菌，還包括真菌、病毒、螺旋體及古細(xì)菌等?？谇粌?nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)易受外界因素的干擾，口腔內(nèi)部有多位點(diǎn)、多層次的微生物定植生態(tài)區(qū)，口腔環(huán)境的異質(zhì)性較腸道更為明顯。正常情況下口腔微生物群落之間、微生物與宿主之間密切且復(fù)雜的相互作用維持著宿主健康，這種生態(tài)平衡被打破將會(huì)引發(fā)疾病?？谇恢饕膊∪琮x病、牙周病及口腔癌等嚴(yán)重影響人類的生命健康。

　　基于16S rDNA/18S rDNA基因，優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方法，增加對(duì)痕量微生物的研究，利用高通量測(cè)序技術(shù)（Roche 454，Illimina MiSeq 2*300、Ion Torrent PGM）來(lái)分析口腔微生物的多樣性，得到對(duì)微生物多樣性、群落結(jié)構(gòu)、種系關(guān)系精確的解析，增加人們對(duì)口腔健康與疾病相關(guān)微生物的認(rèn)識(shí)。

呼吸道微生物

　　定殖于呼吸道部的微生物與人體始終處于動(dòng)態(tài)生態(tài)平衡，對(duì)于維持人體健康發(fā)揮著重要作用，也與多種上呼吸道疾病的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。呼吸道微生物之間及其與宿主之間的相互作用是引發(fā)人體上呼吸道疾病的重要因素。人體呼吸道的密度只有104?105細(xì)胞數(shù)/cm²。
基于16S rDNA/18S rDNA基因，優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方法，增加對(duì)痕量微生物的研究，利用高通量測(cè)序技術(shù)（Roche 454，Illimina MiSeq 2*300、Ion Torrent PGM）來(lái)分析呼吸道微生物的多樣性，得到對(duì)微生物多樣性、群落結(jié)構(gòu)、種系關(guān)系精確的解析，增加人們對(duì)呼吸道健康與疾病相關(guān)微生物的認(rèn)識(shí)。

微基生物進(jìn)行人體健康相關(guān)的研究與應(yīng)用：

微基生物提供與人體健康相關(guān)的生信/統(tǒng)計(jì)服務(wù)：

更多微生態(tài)方向研究和生物信息方面服務(wù)，請(qǐng)?jiān)斣儯?em>400-660-9270

口腔與呼吸道微生態(tài)高通量分析流程

樣品采集及運(yùn)送：

　　新鮮樣品：分泌物2-3 mL

　　DNA樣品：請(qǐng)?zhí)峁舛却笥?10ng/uL，總量大于 500ng 的基因組 DNA，DNA 純度較差或降解嚴(yán)重會(huì)影響后繼的擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)。如果方便的話，可提供電子版DNA電泳檢測(cè)照片及 OD260/280=1.8-2.0比值

　　樣品運(yùn)送：送樣時(shí)采用干冰保存運(yùn)輸；若是距離較遠(yuǎn)，建議采用干冰加冰袋，存放于冰盒中。

• 生信/統(tǒng)計(jì)分析

案例分析

標(biāo)題：患有牙周炎的患者口腔中的致病菌都是以牙齦溝產(chǎn)線菌為中心的微生物群落

研究領(lǐng)域：口腔微生物

高通量測(cè)序平臺(tái)：Illumina MiSeq

測(cè)序區(qū)域：16S rRNA gene V3 region

　　牙周炎是一類多種微生物引起的廣泛的口腔疾病，但對(duì)于其中協(xié)同作用的病原菌仍然知之甚少。用16S rRNA焦磷酸測(cè)序法對(duì)牙周炎患者和健康志愿者的唾液，牙齦，牙菌斑進(jìn)行檢測(cè)，不同口腔環(huán)境孕育著不同的微生物群落和菌種組成。兩步冗余分析得出了21組OUT，包括Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia 和Filifactor alocis，作為可能引起牙周炎的病原菌；以及兩種診斷牙周炎的參數(shù)：牙周袋深度和牙周附著喪失。有趣的是21個(gè)OUT的相似性分析結(jié)果得出Filifactor alocis肯定與其他7種假定的致病菌形成了一個(gè)協(xié)作群體，顯著地在三位患者口腔中存在。這個(gè)發(fā)現(xiàn)展現(xiàn)了巨大的臨床診斷價(jià)值，尤其是在口腔中。因此，我們的研究假定了一個(gè)協(xié)同致病的包括八種致病菌的菌群遍布所有牙周炎患者口腔中，并借此提供一個(gè)研究牙周炎致病菌的框架，以求未來(lái)研發(fā)出新的診斷和治療方法。

主要結(jié)果

　　1.口腔微生物群的整體結(jié)構(gòu)比較

　　2.齦下菌斑更加豐富的專性厭氧型微生物包括Porphyromonas、 Treponema、Tannerella,、Fusobacterium 、Filifactor

　　3.健康與牙周炎患者的唾液和齦上菌斑微生物的不同與RDA分析

　　4.OTU0263和其余7個(gè)OTU表現(xiàn)出強(qiáng)相關(guān)

　　5.在唾液中，共生組ROC曲線以下面積表示被測(cè)試同種系的最高，箭頭意味著這個(gè)點(diǎn)對(duì)于診斷牙周炎的價(jià)值最大

原文鏈接：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25761675
參考文獻(xiàn)：
Chen, H., Y. Liu, M. Zhang, G. Wang, Z. Qi, L. Bridgewater, L. Zhao, Z. Tang and X. Pang (2015). “A Filifactor alocis-centered co-occurrence group associates with periodontitis across different oral habitats.” Sci Rep 5: 9053.

口腔與呼吸道，首發(fā)于微基生物。

　　早期的皮膚微生物研究主要采用傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)方法，來(lái)識(shí)別和描述微生物群落的組成和多樣性。傳統(tǒng)方法的局限性使研究者難以正確全面地闡明皮膚微生物的群落結(jié)構(gòu)和多樣性特點(diǎn)。高通量測(cè)序從根本上改變了人們對(duì)微生物群落的認(rèn)識(shí)，使人們得以系統(tǒng)地分析和認(rèn)識(shí)皮膚微生物的群落及其功能。

　　基于16S rRNA/18S rRNA/ITS基因，優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方法，增加對(duì)痕量微生物的研究，利用二代測(cè)序技術(shù)（Roche 454、IlliminaMiSeq、Ion Torrent PGM）來(lái)分析皮膚微生物的多樣性，為進(jìn)一步理解皮膚的健康、疾病和感染等，全面了解皮膚微生物群落的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及其與皮膚組織和環(huán)境的相互關(guān)系

微基生物進(jìn)行人體健康相關(guān)的研究與應(yīng)用：

微基生物提供與人體健康相關(guān)的生信/統(tǒng)計(jì)服務(wù)：

更多微生態(tài)方向研究和生物信息方面服務(wù)，請(qǐng)?jiān)斣儯?em>400-660-9270

• 樣品采集及運(yùn)送：

　　新鮮樣品：根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)收集樣品

　　DNA樣品：濃度大于10 ng/uL，總量大于500 ng的基因組DNA，DNA純度較差或降解會(huì)影響后繼的擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)。如果方便的話，可提供電子版DNA電泳檢測(cè)照片及 OD260/280的比值。

　　樣品運(yùn)送：送樣時(shí)采用干冰保存運(yùn)輸；若是距離較遠(yuǎn)，建議采用干冰加冰袋，存放于冰盒中。

• 高通量測(cè)序流程：

• 生信/統(tǒng)計(jì)分析

案例分析

標(biāo)題：人體皮膚微生物的多樣性概況

研究領(lǐng)域：皮膚微生物

分析物種：細(xì)菌

取樣方法：取皮膚表皮及皮下組織

　　高通量測(cè)序平臺(tái)：Illumina MiSeq 2×150

　　測(cè)序區(qū)域：16S rRNA gene V4區(qū)

主要結(jié)果：
　?。?）無(wú)皮膚病史的五個(gè)樣本左、右手的113個(gè)OUT的系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)構(gòu)豐度

　?。?）OUT單板描述

　?。?）.該圖展示了樣品根據(jù)它們?chǔ)ㄖ笖?shù)用UPGMA得到的發(fā)育樹

　?。?）.相對(duì)豐度比較

原文鏈接：http://genome.cshlp.org/content/18/7/1043.short

參考文獻(xiàn)：
Grice, E. A., H. H. Kong, G. Renaud, A. C. Young, G. G. Bouffard, R. W. Blakesley, T. G. Wolfsberg, M. L. Turner and J. A. Segre (2008). “A diversity profile of the human skin microbiota.” Genome Research 18(7): 1043-1050.

皮膚微生態(tài)多樣性，首發(fā)于微基生物。