微生物FISH與IF共檢測(cè)

微生物與宿主如何相互作用？傳統(tǒng)技術(shù)存在明顯局限：分離培養(yǎng)、16S rRNA測(cè)序等雖能明確微生物種類(lèi)與豐度，卻無(wú)法定位其在宿主組織或細(xì)胞內(nèi)的具體定植位置。

微基生物IF-FISH共檢測(cè)服務(wù)，創(chuàng)新融合FISH與IF優(yōu)勢(shì)：以微生物特異性核酸探針（如16S rRNA探針）實(shí)現(xiàn)對(duì)微生物的精準(zhǔn)定位與定性，明確其定植區(qū)域及聚集狀態(tài)，同時(shí)借特異性抗體標(biāo)記，量化宿主目標(biāo)蛋白表達(dá)并解析細(xì)胞功能，實(shí)現(xiàn)微生物定位、活性及宿主互作的多維解析。

 

服務(wù)流程

 

 

實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵注意事項(xiàng)

1.探針-抗體兼容性?xún)?yōu)化：針對(duì)不同抗體的孵育溫度、時(shí)間、濃度參數(shù)，定制專(zhuān)屬雜交方案，避免交叉干擾，確保雙重信號(hào)高效捕獲。客戶(hù)需提供抗體。

2.嚴(yán)格質(zhì)控體系：設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照（已知陽(yáng)性樣本）、陰性對(duì)照（無(wú)探針?lè)跤M）、探針特異性對(duì)照及抗體陰性對(duì)照，嚴(yán)格優(yōu)化雜交溫度、洗脫強(qiáng)度等條件，確保特異性信號(hào)檢測(cè)。

3.多通道檢測(cè)支持：支持4色熒光通道同步檢測(cè)（含DAPI染核通道），可同時(shí)標(biāo)記3種目標(biāo)微生物，滿(mǎn)足復(fù)雜實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)需求。

4.樣本質(zhì)量要求：石蠟切片需經(jīng)梯度脫蠟確保探針穿透性，冰凍切片快速固定防止組織自溶，菌液/涂片樣本優(yōu)化分散度避免聚集影響觀察。

 

樣本類(lèi)型與檢測(cè)周期   

支持樣本：冰凍切片、石蠟切片、菌液/菌體涂片、活性淤泥樣本等

檢測(cè)周期：實(shí)驗(yàn)材料（樣本、抗體、探針等）備齊后2-4周，具體以合同約定為準(zhǔn)

 

文獻(xiàn)分享 

腫瘤內(nèi)微生物促進(jìn)乳腺癌轉(zhuǎn)移機(jī)制研究

（文獻(xiàn)來(lái)源：Fu A K, Yao B Q, Dong T T, et al. Tumor Resident Intracellular Microbiota Promotes Metastatic Colonization in Breast Cancer〔J〕. Cell, 2022）

1.檢測(cè)方法：

采用FISH與IF共檢測(cè)技術(shù)，以16S rRNA FISH探針標(biāo)記細(xì)菌，結(jié)合角蛋白8+18、LPS、LTA 等特異性抗體，同步實(shí)現(xiàn)微生物定位與宿主細(xì)胞/蛋白標(biāo)記，搭配DAPI染核完成多維度觀測(cè)。

2.關(guān)鍵檢測(cè)結(jié)果與圖像解析：

1）腫瘤組織中微生物定位

16S FISH與IF共染色證實(shí)，腫瘤內(nèi)細(xì)菌主要定植于腫瘤細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，核周區(qū)域呈點(diǎn)狀分布，且同時(shí)存在革蘭氏陽(yáng)/陰性菌，證實(shí)腫瘤組織存在穩(wěn)定定植的微生物群落。

(A) 16S FISH分析（紅色）顯示細(xì)菌在核周區(qū)域呈點(diǎn)狀分布；(B) LPS IHC染色（革蘭氏陰性菌，紅色）；(C)LTA染色（革蘭氏陽(yáng)性菌，紅色），藍(lán)色為DAPI染核。

2）肺轉(zhuǎn)移灶中微生物分布

肺轉(zhuǎn)移灶區(qū)域富集大量細(xì)菌信號(hào)，正常肺組織中細(xì)菌信號(hào)極少，證明腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移時(shí)會(huì)攜帶微生物定植于遠(yuǎn)端器官。

 

  

 

(F)16S FISH分析帶有PyMT腫瘤轉(zhuǎn)移的肺組織切片。

(G) 血液中角蛋白8+18抗體和16S探針染色和定量循環(huán)腫瘤細(xì)胞中的細(xì)菌。

注：紅色-16S FISH 探針，藍(lán)色-DAPI，綠色-腫瘤細(xì)胞標(biāo)志物。

 

微基生物憑借專(zhuān)業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)、標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)流程、先進(jìn)的檢測(cè)設(shè)備及豐富的項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)，為您提供優(yōu)質(zhì)的微生物FISH與IF共檢測(cè)服務(wù)。我們將全程為您提供技術(shù)支持，從實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)到結(jié)果解讀一站式解決，助力您在科研道路上快速突破、成果斐然！