糞便樣本的采集保存方法

1 樣本的采集

1.1 人糞便樣本的采集

根據(jù)實(shí)驗(yàn)的目的，確定選擇受試者的條件，如年齡、體重、糖尿病、身體健康狀況、有無特殊疾病等因素。根據(jù)考慮的因素，選擇符合條件的受試者。向受試者交代實(shí)驗(yàn)的目的、過程、風(fēng)險(xiǎn)、收益及退出機(jī)制等，確保受試者理解全部實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，待受試者簽訂知情同意書后開始取樣。

讓受試者將糞便排泄到干凈的容器中，盡量避免尿液、馬桶壁等對(duì)糞便樣本的污染。糞便要采集新鮮的，建議采集排泄中后部的糞便，并盡量挖取中部?jī)?nèi)側(cè)的糞便作為樣本。用無菌勺對(duì)新鮮的糞便進(jìn)行挖取，將糞便樣本放入無菌保存管中，樣本需 1g 左右。采集好的樣本立刻放入-80℃冰箱進(jìn)行低溫保存。

1.2 小鼠糞便樣本的采集

對(duì)于小鼠糞便樣本的采集，建議采用拎尾法進(jìn)行采集。小鼠排便后用滅菌的鑷子夾取小鼠糞便，樣本通常需 1g 左右，最少不低于 0.2g。樣本采集后立刻放入-80℃冰箱進(jìn)行低溫保存，如果樣本珍貴，需要進(jìn)行備份。

1.3 大鼠糞便樣本的采集

在取樣當(dāng)天換無菌墊料單獨(dú)喂養(yǎng)大鼠，用滅菌的鑷子夾取大鼠的糞便，當(dāng)收集完一只大鼠的糞便后，用酒精擦拭鑷子進(jìn)行滅菌，繼續(xù)收集另外一只大鼠的糞便。收集好的糞便放入無菌的 EP 管。每只大鼠糞便樣本需 1g 左右。采集好的樣 本需立刻放入-80℃冰箱進(jìn)行保存。若采樣時(shí)間較長(zhǎng)，可以將采集好的樣本放入冰盒（泡沫盒+干冰或冰袋）中進(jìn)行存放，之后到實(shí)驗(yàn)室后再放入-80℃冰箱。

若無法實(shí)現(xiàn)低溫保存，可以采用微基生物研發(fā)的糞便微生物 DNA 常溫保存液，可以實(shí)現(xiàn)糞便微生物樣本DNA檢測(cè)的常溫保存和運(yùn)輸。

 2 樣本的保存和寄送

將樣本放入-80℃冰箱進(jìn)行低溫保存，若條件不允許，可短期（1 個(gè)月內(nèi)）在-20℃冰箱中冷凍保存。注意在樣本凍存期間，請(qǐng)勿反復(fù)凍融。 送樣時(shí)請(qǐng)盡量使用冰盒（泡沫盒+干冰+冰袋），以保證運(yùn)輸過程中的低溫條件（干冰的揮發(fā)消耗量約為 3 公斤/天）。在打包時(shí)先放入足量的干冰，之后用冰袋填充泡沫盒中間的空隙，為了保持冰盒中的低溫環(huán)境，建議采用厚一點(diǎn)的泡沫盒。