CRISPR-Cas 靶向基因編輯服務

簡介

CRISPR-Cas技術(shù)在微生物研究中有極為廣泛的應用，主要范圍包括重要功能基因改造、基因表達控制、代謝工程研究、合成生物學等，為科研和生物技術(shù)應用提供了簡單、有效的操作工具。我們提供微生物基因組改造服務，可針對不同的菌株，利用CRISPR-Cas9或Cas12a技術(shù)實現(xiàn)無痕的靶向基因敲除、突變和敲入。目前這兩項編輯技術(shù)都表現(xiàn)出各自的優(yōu)勢和局限性，因此我們會根據(jù)客戶的需求，個性化制定雙質(zhì)粒CRISPR-Cas9或CRISPR-Cas12a實驗，為您提供高效及精準的一體化微生物基因編輯服務。

 

送樣要求

 

技術(shù)路線

文獻解讀

標題：5‐Aminolevulinic acid production from inexpensive glucose by engineering the C4 pathway in Escherichia coli

通過改造大腸桿菌的碳4路徑以葡萄糖為來源提高5-氨基乙酰丙酸的產(chǎn)量

期刊名稱：Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology

發(fā)表時間：2017年8月

主要內(nèi)容

本研究利用雙質(zhì)粒CRISPR-Cas9系統(tǒng)，在大腸桿菌中敲除sucCD 基因并敲入紅細菌的hemA基因。通過靶向基因編輯，顯著提高了5-氨基乙酰丙酸（ALA）在大腸桿菌中的產(chǎn)量。ALA是四吡咯化合物天然生物合成路線中第一個合成中間體，由于其廣泛的潛在應用，引起了廣泛的關注。

ALA在不同重組大腸桿菌中的濃度比對。M3為對照組，改造菌株的ALA產(chǎn)量均有不同程度的提高。

 

原文鏈接：https://academic.oup.com/jimb/article/44/8/1127/6014985 

 

標題：CRISPR-Cas12a-Assisted Recombineering in Bacteria

期刊名稱：Applied and Environmental Microbiology (ASM Journal)

發(fā)表時間：2017.06

主要內(nèi)容

簇狀規(guī)則間隔短回文重復序列(CRISPR)-Cas12a(Cpf1)已經(jīng)成為許多生物中有效的基因組編輯工具。在這里，本研究開發(fā)并優(yōu)化了一個CRISPR-Cas12a輔助的細菌基因編輯技術(shù)。使用這個系統(tǒng)可以有效的實現(xiàn)對大腸桿菌、鼠疫桿菌和分枝桿菌的基因敲除和敲入。優(yōu)化的CRISPR-Cas12a 技術(shù)不需要引入將抗生素基因來篩選重組菌株，因此這是一種有效的方法，可以產(chǎn)生無標記和無瘢痕的重組細菌。

pMT是天然存在于鼠疫耶爾森氏菌中的一種質(zhì)粒，利用CRISPR-Cas12a技術(shù)可以在該質(zhì)粒中產(chǎn)生caf1R突變。本實驗將四個精氨酸密碼子突變?yōu)楸彼崦艽a子，最高編輯效率達到90%。

  

原文鏈接：https://journals.asm.org/doi/10.1128/AEM.00947-17