數(shù)字PCR即Digital PCR(dPCR),它是一種核酸分子絕對定量技術(shù)。相較于傳統(tǒng)的qPCR,數(shù)字PCR可讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個數(shù),是對起始樣品的絕對定量。
數(shù)字PCR是最新的定量技術(shù),基于單分子PCR方法來進行計數(shù)的核酸定量,是一種絕對定量的方法。主要采用當前分析化學(xué)熱門研究領(lǐng)域的微滴化方法,將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微滴中,每個反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后,有一個核酸分子模板的反應(yīng)器就會給出熒光信號,沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應(yīng)器的體積,就可以推算出原始溶液的核酸濃度。
數(shù)字PCR的檢測原理
數(shù)字PCR的優(yōu)勢
無需標準品(標準曲線),對靶標分子實現(xiàn)絕對定量
可以實現(xiàn)0.01%或以上的突變檢出率,更高的靈敏度;
有效區(qū)分濃度差異(變化)微小的樣品,更高的精密度和重復(fù)性;
不依賴擴增效率,能克服PCR抑制劑的影響,特別適合基質(zhì)復(fù)雜樣本的檢測。
可檢測樣本及類型
土壤、水體、糞便、沉積物等樣本中細菌、真菌等微生物絕對量
土壤、水體等樣本的抗生素抗性基因的絕對量
土壤、沉積物等樣本中碳循環(huán)、氮循環(huán)、硫循環(huán)等功能基因的絕對量

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